비오틴 라벨 단백질

PrecisionAvi 시리즈

이 시리즈의 제품은 Avitag™ 기술을 사용하여 독점적으로 생산됩니다.간단히 말해서, 독특한 15개 아미노산 펩타이드 곳  Avi 태그가 발현 벡터 구성하는 동안 재조합 단백질에 도입됩니다. Avi 태그의 단일 라이신 잔기는 E. Coli 비오틴 리가제 BirA에 의해 효소적으로 비오틴화됩니다.

이 단일 지점 효소 라벨링 기술은 일반적으로 사용되는 결합 분석에 많은 이점을 제공합니다.

• 비오틴화는 Avi 태그의 라이신 잔기에서만 발생합니다.

• 목표 단백질의 자연적인 결합 활동을 방해하지 않습니다.

• 단백질 방향은 아비딘 코팅된 표면에 고정될 때 균일합니다.

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울트라리스 시리즈

이 시리즈의 제품은 자체 개발한 화학 라벨링 방식을 사용하여 생산됩니다. 라이신 잔기의 측쇄 및 단백질의 N-말단에 있는 1차 아민은 비오틴과 접합되어 일반적으로 단일 단백질 분자에 다중 비오틴 부착을 초래합니다.

• 더 높은 민감도

• 자체 개발한 화학물질 라벨링 방식

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자연적 형태와 변형에 가장 가깝습니다

비오틴화된 단백질을 포함한 재조합 단백질의 생산은 당사의 독점적인 HEKMax® 발현 플랫폼을 사용하여 수행됩니다. 인간 HEK293 세포는 발현 숙주로서 다른 세포 유형에 비해 다양한 장점이 있으며 아래 표에 요약되어 있습니다.

높은 생물 활성 및 검출 감도

비오틴화된 단백질의 생리활성은 단백질 자체의 구조와 비오틴화가 수행되는 방식에 의해 결정됩니다. 모든 단일 단백질에 대해 태그 및 비오틴화 방법의 여러 옵션을 테스트하고 다양한 결합 분석에서 제품을 평가합니다. 최고의 성능을 가진 것만 선별하여 생산합니다.  Figure 1은 내부 평가 실험의 예입니다.

Fig. 1 Binding activity of different forms of biotinylated PD1 evaluated in a functional ELISA against rhPD-L1 (Cat. No. PD1-H5258).

Our biotinylated proteins demonstrate high bioactivity and superb detection sensitivity in different application. In functional ELISA, the biotinylated human TACI has high binding activity with BAFF as showed in Fig. 2. Interestingly, oriented immobilization of biotinylated CD155 offers much higher sensitivity than random immobilization of unconjugated CD155 as showed in Fig. 3. Fig.4 and Fig. 5 show that the biotinylated PD1 can be well applied to AlphaLISA to detect the binding activity with its ligand PD-L1 and PD-L2. The Fig. 6 and Fig. 7 show that the biotinylated protein can be easily used for determining the affinity between protein and therapeutic antibody in SPR assay. Also, the biotinylated proteins are often used in cell based assay, such as cytotoxicity assay and evaluation of CAR expression (Fig. 8 & Fig. 9).

Fig.2 Immobilized Human BAFF, Fc Tag, active trimer (Cat. No. BAF-H5261) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human TACI, Fc,Avitag (Cat. No. TAI-H82F6) with a linear range of 0.002-0.05 μg/mL.

Fig. 3 Comparison of oriented immobilization (biotinylated CD155 on precoated streptavidin plate, Cat. No. CD5-H82E3) and random immobilization (unconjugated CD155 direct coating on 96-well plate, Cat. No. CD5-H5223）binding to TIGIT（ Cat. No. TIT-H5254）. Oriented immobilization of biotinylated CD155 offers much higher sensitivity than random immobilization of unconjugated CD155.

Fig 4. Biotinylated Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）at 1 μg/mL (5 μL/well) can bind Human PDL1 (Cat. No. PD1-H5229) with a linear range of 0.02-0.625 μg/mL.

Fig 5. Biotinylated Human PD-1（Cat. No. PD1-H82F1）at 1 μg/mL (5 μL/well) can bind Human  PDL2 (Cat. No. PD2-H5220) with a linear range of 0.02-0.625 μg/mL.

Fig. 6 Immobilized biotinylated human VEGF165 (Cat. No. VE5-H82Q0) on CM5 Chip via streptavidin, can bind Avastin with an affinity constant of 0.417nM as determined in SPR assay (Biacore T200).

Fig.7 Loaded Biotinylated Human PD-1, Avitag,His Tag (recommended for biopanning) (Cat. No. PD1-H82E4) on SA Biosensor, can bind Human PD-L1, His Tag (HPLC verified) (Cat. No. PD1-H5229) with an affinity constant of 2.4 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e).

Fig. 8 Recombinant human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) induces cytotoxicity effect on the WEH1-13VAR cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The EC50 for this effect is 0.014-0.029 ng/ml. The result shows that the biotinylated human TNF-alpha is consistent with naked TNF-alpha in cytotoxicity assay.

                 

배치간의 변동이 낮습니다.

We routinely apply rigorous quality control measures to ensure consistent performance of our products. Newly produced products are subjected to side-by-side comparison with our internal standard in a variety of assays. Only those within an acceptable margin of difference are allowed to be released. As demonstrated in Fig. 9, three different batches of biotinylated hTNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) are tested and compared using a standard ELISA analysis against Adalim*mab, the result shows that the batch variation among the tested samples is negligible. The batch-to-batch conformance is also good as displayed in cell based assay (Fig. 10).

Fig. 10 In the above ELISA analysis, three different lots of biotinylated hTNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) were used detect immobilized Adalim*mab (0.5 ug/ml). The result showed that the batch variation among the tested samples is negligible.

Fig. 11 Recombinant biotinylated human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) induces cytotoxicity effect on the WEH1-13VAR cells in the presence of the metabolic inhibitor actinomycin D. The EC50 for this effect is 0.029-0.052 ng/ml.